发展一种新的LAMP技术快速检测石斑鱼虹彩病毒(PDF 70页)

3．1材料与方法
3．1．'材料
3．1．1．1聚合酶及其他工具酶
3．1．1．2病毒和细胞
3．1．1．3试剂仪器
3．1．23 SVCV eDNA的合成，
3．1．2A SVCV总RNA的提取
3．1．2方法
3．1．2．1针对SGIV 0RF-014L的LA／VlP检测技术的建立
3．1．2．1．1 L舳佃的引物设计
3．1．2．1．2 L舢旧扩增的反应条件
3．1．2．1．3 LAMP扩增产物的鉴定
3．1．2．2巢式PCR检测SGIV方法的建立
3．1．2．3紫外分光测定质粒DNA纯度和浓度
3．2结果
3．2．1 LAMP引物的设计和特异性
3．2．2 LAMP的反应条件的确立
3．2．3 LAMP检测的种问特异性
3．2．4 LAMP扩增技术的检测极限及其与Nested PCR的比较
3．2．5副产物沉淀法及SYBR Green I显色法的敏感性对比(直接观察法)
4．1材料与方法
4．1．1材料
4．1．1．1细胞与病毒
4．1．1．2培养基
4．1．1．3抗生素
4．1．1．4酶类以及试剂盒
4．1．1．5 RNA提取溶液：
4．1．2A总RNA提取
4．1．2方法
4．1．2．1 SGIV感染细胞及收集
4．1．2．2 SGlV感染石斑鱼及鱼体组织收集
4．1．2．3 SGlV DNA的提取
4．1．2．5紫外分光测定RNA纯度和浓度
4．1．2．6 RNA逆转录成eDNA
4．2所示)。
4．2结果
4．2．1 LAMP扩增技术检测SGIv感染的6P细胞
4．2．2 LAMP扩增技术检测SGIV感染的石斑鱼组织
4．2．3 LAMP扩增技术检测SG|V 014L在细胞中的转录表达
表1-2LAMP引物组成
表1．1已报道的虹彩病毒基因组特性
表1．3 LAMP技术在病原检测中的应用概况
表3．1 SGIV ORF．014L的LAMP引物组
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