兽疫链球菌的改良及其发酵生产透明质酸论文(DOC 73页)
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点击下载1 绪论....1
1.1 透明质酸的理化性质....1
1.2 透明质酸的分布及生理功能....1
1.2.1 透明质酸的分布....1
1.2.2 透明质酸生理功能....2
1.3 透明酸的应用....2
1.3.1 在化妆品中的应用....2
1.3.2 在医学方面的应用....3
1.4 透明质酸生产现状....3
1.4.1 获得高产菌株....4
1.4.2 培养基及发酵条件优化....5
1.4.3 发酵液中透明质酸含量检测方法....5
1.4.4 透明质酸的提取....6
1.5 课题研究内容和目的....6
1.5.1 本课题研究内容....6
1.5.2 本课题主要目的....7
2 透明质酸产生菌的分离、筛选与初步鉴定....8
2.1 实验材料....8
2.1.1 采样....8
2.1.2 主要培养基及溶液组成....8
2.2 实验方法....9
2.2.1 透明质酸的分离纯化....9
2.2.2 菌种的筛选....10
2.2.3 菌种的初步鉴定....10
2.3 实验结果与讨论....11
2.3.1 菌种的筛选....11
2.3.2 菌种的分类鉴定....13
2.4 本章小结....13
3 透明质酸含量检测方法建立....14
3.1 实验材料....14
3.1.1 主要仪器....14
3.1.2 主要试剂....14
3.2 实验方法....15
3.2.1 透明质酸的初步纯化....15
3.2.2 CTAB比浊法....15
3.2.3 改良Bitter-Muir法....15
3.3 结果与讨论....15
3.3.1 CTAB比浊法....15
3.3.2 Bitter-Muir法....20
3.3.3 两种方法准确性比较....22
3.3.4 两种方法精确性比较....22
3.3.5 两种方法直接测定发酵液中HA含量的比较....23
3.4 本章小结....23
4 透明质酸高产菌的诱变选育....24
4.1 实验材料....24
4.1.1 菌种....24
4.1.2 主要培养基及溶液....24
4.1.3 主要仪器....25
4.2 实验方法....25
4.2.1 LiCl处理....25
4.2.2 紫外诱变....25
4.2.3 NTG诱变....25
4.2.4 微波诱变....26
4.2.5 紫外+NTG诱变....26
4.2.6 紫外+NTG+微波诱变....26
4.2.7 中间培养....26
4.2.8 稀释涂板....26
4.2.9 突变菌株筛选....27
4.3.10 分析方法....27
4.3 结果与讨论....27
4.3.1 紫外诱变最佳时间的选择....27
4.3.2 NTG诱变最佳条件....28
4.3.3 微波诱变最佳条件选择....30
4.3.4 诱变结果分析....30
4.4 本章小结....33
5 透明质酸发酵法生产工艺条件的初步研究....35
5.1 实验材料....35
5.1.1 菌种....35
5.1.2 培养基....35
5.2 实验方法....36
5.2.1 发酵条件的优化....36
5.2.2 添加剂对发酵的影响....37
5.3 结果与讨论....37
5.3.1 发酵条件优化结果....37
5.3.2 添加剂的影响....40
5.4 本章小结....42
6 透明质酸合成酶基因克隆与载体构建初步研究....43
6.1.1 菌株、质粒....43
6.1.2培养基....43
6.1.3 酶、化学试剂....44
6.1.4主要实验试剂配方....44
6.1.5 PCR扩增用引物....44
6.2 实验方法....45
6.2.1 提取兽疫链球菌总DNA....45
6.2.2 目的基因的PCR扩增....45
6.2.3 PCR扩增DNA片段的回收纯化....46
6.2.4感受态细胞的制备....46
6.2.5 质粒DNA(PET-22b)的提取与检测....47
6.2.6目的基因片段和质粒的双酶切....47
6.2.7 双酶切产物回收....47
6.2.8 双酶切后的目的基因和质粒连接....48
6.2.9 重组质粒PET-22b导入E.coli DH5а感受态细胞....48
6.2.10 重组质粒的提取....48
6.3 结果与讨论....48
6.3.1 基因组总DNA提取结果....48
6.3.2 hasA片段的PCR扩增....49
6.3.3质粒DNA(PET-22b)的提取结果....50
6.3.4 hasA基因和PET-22b双酶切电泳检测....51
6.3.5 重组质粒的表达....51
6.3.6 转化子的测序验证....52
6.4 本章小结....53
7 结论与展望....54
参 考 文 献....56
攻读硕士学位期间研究成果....60
致 谢....61
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