基因工程技术概述(ppt 51页)
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资料简介：
主要内容
基因工程技术
定义：
应用：
基因工程基本步骤：
基因工程流程示意图
构建重组分子（连接）
目的基因片段来源：
目的基因来源选择：
PCR：
片断的回收与纯化
载体：
穿梭载体(shuttIe vector)
质粒载体
克隆载体: PBR322
TA 克隆
TOPO-TA
表达载体：带有调控基因表达所必需的转录与翻译元件，如启 动子等，这些调控元件应与宿主细胞相适应。
真核表达载体：大多是穿梭载体。
pFLAG-CMV系列(Sigma)
Tet-On/Tet-Off Expression Systems
DNA分子的体外连接：方法
两种情况：
碱性磷酸酶处理：
平头末端：
其他方法：
连接策略：
选择连接位点：
连接浓度：
连接反应：
连接酶：两种
其他酶：末端修饰酶
重组子导入受体细胞：
重组子导入受体细胞：途径
转化
感受态菌制备
氯化钙法：原理
重组子的筛选：
插入失活：
α互补现象：蓝白斑筛选
Protocol:
阳性克隆的鉴定：
碱裂解法
试剂作用：
初步鉴定
后续：
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